無塵室沉降菌測試標準操作規程

無塵室主要之作用在于控制產品(如硅芯片等)所接觸之大氣的潔凈度日及溫濕度，使產品能在一個良好之環境空間中生 產、制造，此空間我們稱之為潔凈室。
一、菌落：細菌培養后，由一個或幾個細菌繁殖而形成的一細菌集落，簡稱CFU。通常用個數表示。
二、測試方法：沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養基平皿，經48小時以上培養，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落數，來評定潔凈環境內的活微生物數，并以此來評定無塵室的潔凈度。

三、所用的儀器和設備
1、高壓消毒鍋：使用時參照文件ZJ-JC-SOP-066-00進行操作。

2、恒溫培養箱：必須定期對培養箱的溫度計進行檢定。

3、培養皿：一般采用中90mm×15mm硼硅酸玻璃培養皿。使用前將培養皿置于121℃濕熱滅菌20分鐘。
四、培養基：普通營養瓊脂培養基。將培養基加熱熔化，冷卻至約45℃在無菌操作條件下將培養基注入培養皿，每皿約15m1。待瓊脂培養基凝固后，將培養基平皿放入30～35℃恒溫培養箱中培養數小時，若培養基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用，制備好的培養基平皿應在2～8℃的環境中存放。

五、測試步驟
1、采樣方法：將已制備好的培養皿放置在預先確定的取樣點，打開培養皿蓋，使培養基表面暴露0.5小時，再將培養皿蓋上蓋后倒置。
2、培養，時間不少于48小時。每批培養基應有對照試驗，檢查培養基本身是否污染，可每批選定3只培養皿作對照培養。

3、菌落計數：用肉眼直接計數，然后用5～10倍放大鏡檢查，有否遺漏。若培養皿上有2個或2個以上菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上的菌落計數。

六、注意事項
1、測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。

2、采取一切措施防止人為對樣本的污染。

3、對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。

4、由于細菌種類繁多，差別甚大，計數時一般用透射光于培養皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與培養基沉淀物的區別，必要時用顯微鏡鑒別。
5、采樣前應仔細檢查每個培養皿的質量，如發現變質、破損或污染的應剔除。

七、測試規則
1）測試狀態
1、沉降菌測試前：被測試無塵室（區）的溫濕度須達到規定的要求，靜壓差、必須控制在規定值內。被測試無塵室（區）已消毒。

2、測試狀態有靜態和動態兩種，并在報告中注明測試狀態。

3、測試人員：測試人員必須穿戴符合環境潔凈度級別的工作服。靜態測試時，室內測試人員不得多于2個人。

2）測試時間
（1）對單向流，如100級凈化房間內及層流工作臺，測試應在凈化空調系統正常運行不少于10分鐘后開始。

（2）對非單向流，如10000級、100000級以上的凈化房間，測試應在凈化空調系統正常運行不少于30分鐘開始。

8沉降菌計數
1）采樣點數目：可按表1確定。在滿足*少測點數的同時，還宜滿足*少培養皿數，見表2。
表1 *少采樣點數目

注：表中的面積對于單向流無塵室是指送風面積，對于非單向流無塵室是指房間面積。

表2 *少培養皿數

2、采樣點的布置：工作區測試點位置離地0.8～1.5m左右（略高于工作面）。可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點，采樣點的布置應力求均勻，避免采樣點在某局部區域過于集中，某局部區域過于稀疏。
3、記錄：測試報告中應記錄房間溫度、相對濕度、壓差、測試狀態及測試數據。

4、結果計算：用計數方法得出各個培養皿的菌落數。平均菌落數的計算見下式：m1+m2+……+mn平均菌落數m=n式中：m為平均菌落數；m1為1號培養皿菌落數；m2為2號培養皿菌落數；mn為n號培養皿菌落數；n為培養皿總數。

5、結果評定：用平均菌落數判斷無塵室的空氣中的微生物。

6）無塵室（區）內的平均菌落數必須低于所選定的評定標準（見表3）。

表3

7、若某無塵室（區）的平均菌落數超過評定標準，則必須對此區域先行消毒，然后重新測試兩次，測試結果必須合格。

8、萬級無塵室生產車間按生產工藝和產品質量要求，分為一般生產區、控制區和。設人員換鞋區、男女一、二次更衣室、洗手、手消毒、洗衣間、風淋室通道、潔凈人流走廊、物流貨淋走道、注塑間、膠墊吹塵、中儲庫、組裝間、內包裝間、外包裝間及機房、物流等。機房需做隔音防震處理;設備運行負荷符合樓板承重要求。
人員流動方向：換鞋、更衣、洗手、手消毒–風淋通道–潔凈走廊–潔凈車間在走廊設安全門，便于人員疏散。物品流動方向：物流通道——潔凈車間——–成品包裝。